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De acuerdo con una realización de cáncer de próstata que analiza la sangre rna en presente divulgación, el producto amplificado puede detectarse directamente usando balizas moleculares como cebadores para el ensayo de amplificación por ejemplo, ensayos NASBA multiplexada en tiempo real o PCR o indirectamente usando, dentro de los sitios de unión del par de cebadores, una 10 Dietas rapidas baliza molecular de 18 a 25 nucleótidos de longitud por ejemplo, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25que hibrida específicamente con el producto de amplificación.

Se prefieren las sondas o cebadores balizas moleculares que tienen una longitud comprendida entre 18 y 25 nucleótidos cuando se usan de acuerdo con la presente divulgación Tyagi y col.

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Por supuesto, no. Debe entenderse que las secuencias y los tamaños de los cebadores indicados en la tabla 1 son arbitrarios y que se pueden diseñar una multitud de otras secuencias que se pueden usar de acuerdo con la presente divulgación.

Preferentemente, la.

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Por supuesto, la presente. En una realización, los reactivos de detección son sondas.

En otra realización, los reactivos de detección son compuestos quimioluminiscentes tales como éster de acridinio EA. Dichos contenedores permiten la eficiente transferencia de reactivos de un compartimento a otro compartimento de modo que las muestras y los reactivos no sufren contaminación cruzada y los agentes o soluciones de cada contenedor pueden añadirse de un modo cuantitativo de un compartimento a otro.

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Como se ha mencionado anteriormente, un experto en la técnica a la que pertenece la presente divulgación puede adaptar la separación o combinación de los reactivos de acuerdo con el tipo de kit que se prefiere por ejemplo, un kit de diagnóstico basado en procedimientos de amplificación o hibridación o amboslos tipos de reactivos usados y su.

En una realización, un contenedor contiene los reactivos de amplificación y un contenedor cáncer de próstata que analiza la sangre rna en contiene el reactivo de detección.

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Dichas secuencias adicionales son, preferentemente, una secuencia de cola. En otra realización se usa un reactivo de captura no específico por ejemplo, esferas de sílice. En una realización adicional, las células contenidas en muestras de orina miccionadas obtenidas tras un tacto rectal atento se recogen y se lisan en un tampón de lisis.

La detección de la presencia de ARN codificado por el. Los procedimientos divulgados en el presente. Cada muestra se procesó. Las células se sedimentaron mediante centrifugación en cáncer de próstata que analiza la sangre rna en centrífuga de mesa a 1.

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Después, el sedimento celular se agitó en vórtex enérgicamente durante 20 segundos con el fin de lisar las células. Es importante asegurarse de que no queda nada de materia particulada.

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El lisado era transparente y no demasiado viscoso. Facilitando la transferencia de la materia particulada, el microtubos se agitó en vórtex brevemente aproximadamente 5 segundos con el fin de resuspender el contenido.

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Se realizó lo mismo. Las unidades de filtro de membrana que contenían la sílice se transfirieron a nuevos microtubos de 2 ml.

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Las unidades de filtro de membrana con la sílice se transfirieron a nuevos microtubos de 2 ml. Desechar los microtubos que contienen el flujo continuo. Las etapas de elución se repitieron una vez obteniendo un segundo eluato.

Cada muestra se realizó al menos por duplicado.

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La presente divulgación busca satisfacer estas y otras necesidades. También debe reconocerse 65 que en la técnica se conocen bien numerosos procedimientos para estabilizar o proteger las células de próstata contenidas en la muestra de orina o en otra muestra, así como para estabilizar o proteger el ARN presente en estas células.

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Los procedimientos de amplificación in vitro conocidos incluyen, por ejemplo, amplificación mediada por transcripción, amplificación mediada por replicasa, amplificación mediante reacción en cadena de la polimerasa PCRamplificación mediante reacción en cadena de la ligasa LCR y 35 amplificación por desplazamiento de hebra SDA.

Obsérvese que 5 cuanto menor es el fragmento de ADN, mayor es la movilidad en la electroforesis en el gel de agarosa.

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La temperatura seleccionada y la 25 concentración de sal se basa en la temperatura de fusión Tm del híbrido de ADN. La detección puede ser directa es 35 decir, resultante de una sonda que hibrida directamente con la secuencia objetivo o amplificada o indirecta es decir, cáncer de próstata que analiza la sangre rna en de una sonda que hibrida con una estructura molecular intermedia que une la sonda a la secuencia objetivo o amplificada.

Es posible detectar en su fase inicial hasta 13 tipos de cáncer el nuevo aparato de detección analiza las micromoléculas de ácido ribonucleico un nuevo biomarcador para diagnosticar precozmente el cáncer de próstata.

Un experto en la técnica puede llevar a cabo la adaptación del protocolo para satisfacer las 55 necesidades deseadas. Por ejemplo, se 15 puede usar un marcador específico de próstata para garantizar que la muestra contenga células específicas de próstata este marcador generalmente se describe en el presente documento como el segundo marcador específico de próstata.

Breve descripción de las figuras La figura 1 muestra la estructura del gen de PCA3 y la localización de los oligonucleótidos y sondas para amplificación de ARN in vitro y la detección del producto amplificado.

Descripción de realizaciones ilustrativas 65 A efectos de claridad de la divulgación, la descripción detallada se divide en las subsecciones siguientes: I.

Sondas y cebadores. El CI en la PCR o técnicas cáncer de próstata que analiza la sangre rna en amplificación relacionadas puede ser ADN plasmídico altamente purificado, 25 superenrrollado o linealizado mediante digestión con una endonucleasa de restricción y repurificado. Si el tratamiento con cinasa es para el marcaje de la sonda, el ATP puede contener radioisótopos de 25 actividad muy específica. Por tanto, 45 las variantes no perdiendo peso a corte y empalme y el ADN genómico no se amplificaría.

Otros marcadores detectables para usar con sondas, que cáncer de próstata que analiza la sangre rna en permitir un incremento de la sensibilidad del procedimiento de la invención, incluyen biotina y radionucleótidos. Como se sabe habitualmente, los nucleótidos radioactivos se pueden incorporar en las sondas de la invención 5 mediante varios procedimientos.

Preferentemente, la 25 muestra es una muestra de orina. Por supuesto, la presente 45 divulgación también abarca el uso de un tercer marcador específico de próstata. Aprendamos un poco acerca de los grupos sanguíneos.

El papel de las biopsias líquidas en la detección del cáncer

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La disfunción eréctil también puede ocurrir. Los efectos secundarios de la terapia hormonal pueden incluir disfunción eréctil, bochornos, pérdida de masa ósea, reducción del impulso sexual, y aumento de peso. Se coloca un gas muy frío en las agujas, lo que hace que el tejido circundante se congele.

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Después se coloca un segundo gas en las agujas para recalentar el tejido. Los ciclos de congelación y de descongelación destruyen las células cancerosas, así como parte del tejido sano circundante.

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Existen diversas técnicas medicinales complementarias que pueden ayudarte a afrontar la angustia, como las siguientes:. Habla sobre tus sentimientos y tus preocupaciones con el médico. En algunos casos, el tratamiento para la angustia puede requerir medicamentos.

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Si presentas signos o síntomas que te preocupan, comienza por consultar cáncer de próstata que analiza la sangre rna en tu médico de cabecera o a un doctor en medicina general.

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Esta comprensión ha estimulado los intentos cada vez mayores de realizar un diagnóstico y tratamiento tempranos. La clave para llevar a cabo cáncer de próstata que analiza la sangre rna en objetivo sigue siendo proporcionar mejores herramientas para el diagnóstico diferencial.

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Tampoco se debería subestimar el impacto psicológico de haber recibido un diagnóstico positivo hasta que se demuestra que es un falso positivo. En consecuencia, se han realizado esfuerzos para mejorar la sensibilidad de la detección de PSA, como investigar otras fuentes de muestras, por ejemplo eyaculados o lavados uretrales inmediatamente después de la eyaculación Clements y col.

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El método de referencia es la biopsia sextante, en la que la recogida de muestras de tejido se guía mediante ultrasonido transrectal. Por ejemplo, Gandini y col. No obstante, los solicitantes han demostrado en una solicitud de patente reciente que este no es el caso solicitud de patente CA 2.

En otra realización divulgada en el presente documento, el ARN se detecta usando un procedimiento de amplificación del ARN. En una realización adicional, cáncer de próstata que analiza la sangre rna en PCR es PCR en tiempo real o un procedimiento relacionado que permite una detección en tiempo real de los productos amplificados.

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Ejemplos no limitantes de tales procedimientos de amplificación de ARN incluyen la amplificación mediada por transcriptasa TMAla Adelgazar 72 kilos por desplazamiento de hebra SDA y la reacción en cadena de la ligasa LCR.

En una realización, se usa el abordaje con balizas moleculares. En otra realización, el producto se detecta en fase sólida mediante el uso de un procedimiento fluorescente o colorimétrico. También se pueden usar otros tipos de sondas y cebadores marcados u otros tipos de procedimientos de detección de acuerdo con la presente divulgación por cáncer de próstata que analiza la sangre rna en, ensayos de hibridación tales como transferencias de tipo Northern, transferencias de manchas o cáncer de próstata que analiza la sangre rna en de ranuras y sondas y cebadores marcados radiactivamente.

En una realización, el ARN codificado por el gen PCA3 se obtiene de una célula contenida en una muestra de orina 45 evacuada del paciente.

En otra realización, la muestra de orina se obtiene después de un tacto rectal TR. Los experimentos demostraron que los procedimientos y kits descritos en el presente documento también se pueden llevar a cabo con estos tipos de muestras.

Otras muestras que se pueden usar incluyen sangre o suero.

Se describen otros procedimientos de este tipo en los libros de texto a los que se hace referencia en el presente documento. También debe reconocerse.

En otra realización, los procedimientos de la presente divulgación se llevan a cabo usando una muestra en bruto, no purificada o semipurificada. En otra realización, un tercer medio contenedor contiene una sonda que hibrida específicamente con el producto de amplificación de PCA3.

Por supuesto, son posibles numerosas realizaciones de los kits divulgados en el presente documento. Por ejemplo, los diferentes medios contenedores se pueden dividir en reactivos de amplificación y reactivos de detección.

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Como alternativa, los reactivos de detección y los reactivos de amplificación pueden estar contenidos en el mismo medio contenedor. Por tanto, por ejemplo, un procedimiento o kit que se basara en ARN para PCA3 podría basarse en ADN para el segundo marcador de próstata o para otras secuencias objetivo. A menos que se defina otra cosa, todos los términos técnicos y científicos y la nomenclatura usados en el presente documento tienen el mismo significado que cáncer de próstata que analiza la sangre rna en experto en la técnica a la que la presente divulgación pertenece entiende habitualmente.

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En general, los procedimientos de biología molecular y similares son procedimientos habituales usados en la técnica. Tales técnicas convencionales se pueden hallar en manuales de referencia tales como, por ejemplo, Sambrook y col.

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En la presente descripción se usan ampliamente una serie de términos. Con el fin de proporcionar una comprensión clara y coherente de la memoria descriptiva y las reivindicaciones, incluido el alcance a dar a dichos términos, se proporcionan las siguientes definiciones. La presente descripción se refiere a una serie de términos de tecnología de ADN recombinante ADNr usados de forma rutinaria.

No obstante, a efectos de claridad y de consistencia se proporcionan definiciones de determinados ejemplos de dichos términos de ADNr. El ADN puede ser bicatenario o monocatenario hebra codificante o hebra no codificante [antisentido]. Normalmente, a esto se le denomina ingeniería genética. Los procedimientos de cáncer de próstata que analiza la sangre rna en in vitro conocidos incluyen, por ejemplo, amplificación mediada por transcripción, amplificación mediada por replicasa, amplificación mediante reacción en cadena de la polimerasa PCRamplificación mediante reacción en cadena de la ligasa LCR y.

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La amplificación por LCR usa al menos cuatro oligonucleótidos distintos. Otro procedimiento de amplificación por desplazamiento de hebra conocido no requiere la rotura por la endonucleasa Dattagupta y col. La amplificación mediada por transcripción se usa en la presente divulgación. USA 86, ; Lizardi y col.

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La presente divulgación abarca, por ejemplo, la transcripción de un gen en su entorno natural. Por supuesto, una unión de una proteína a PCA3 también se puede considerar una función fisiológicamente relevante si esta unión se produce en un entorno natural. Electroforesis en gel de agarosa.

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Obsérvese que. Para visualizar un grupo pequeño de estos fragmentos, se puede aplicar una metodología denominada procedimiento de hibridación por ejemplo, hibridación de tipo Southern. Ejemplos de condiciones de hibridación se pueden 15 encontrar en los dos manuales de laboratorio a los que se ha hecho referencia anteriormente Sambrook y col.

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La concentración de sal y SDS de las soluciones de lavado también se pueden ajustar para acomodarla a la rigurosidad deseada. La temperatura seleccionada y la.

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En estos casos, las condiciones de hibridación y lavado se pueden adaptar de acuerdo con procedimientos bien conocidos por el experto en la técnica. La detección puede ser directa es. Una sonda puede estar marcada o no marcada.

Un ejemplo específico de una etapa de detección usa un procedimiento de detección homogéneo como el descrito con detalle anteriormente en Arnold y col.

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Guichet y col. Otros procedimientos de detección incluyen kits que contienen reactivos divulgados en el presente documento en un contexto de tira reactiva y similares.

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Por supuesto, podría ser preferible usar un procedimiento de detección que se pueda automatizar. Los restos de unión pueden amplificar una señal detectable. Preferentemente, el marcador en una sonda cáncer de próstata que analiza la sangre rna en es detectable en un sistema de ensayo homogéneo, es decir en una mezcla, el marcador unido exhibe un cambio detectable comparado con un marcador no unido. Un marcador detectable homogéneo se puede detectar sin eliminar físicamente las formas hibridadas de las no hibridadas de la sonda marcada.

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Los marcadores detectables homogéneos y los procedimientos para detectarlos se han descrito con detalle en otros lugares por ejemplo, véanse las patentes de EE.

Un oligonucleótido se puede sintetizar químicamente o derivar mediante clonación de acuerdo con procedimientos bien conocidos. Pueden contener nucleótidos raros naturales o sintéticos. Pueden estar diseñados para potenciar un criterio elegido como, por ejemplo, la estabilidad.

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Los cebadores pueden estar diseñados para, por ejemplo, ser específicos de ciertos alelos para usar en un sistema de amplificación específico de alelo. De un modo similar, cualquier cebador de promotor puede servir como cebador, con independencia de su secuencia promotor funcional.

En cuanto a los oligos, puede comprender una serie de tipos de diferentes nucleótidos.

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Amplificación asociada con la transcripción. Los procedimientos de amplificación asociada con la transcripción se han descrito con detalle en otros lugares por ejemplo, las patentes de EE.

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Methods Mol Biol, Por tanto. Reacción en cadena de la polimerasa PCR. La reacción en cadena de la polimerasa se puede realizar de acuerdo con técnicas conocidas.

Véanse, por ejemplo, las patentes de EE. El producto de extensión sintetizado de cáncer de próstata que analiza la sangre rna en cebador también puede servir como molde para la síntesis posterior de los productos de extensión usando los mismos cebadores.

El papel de las biopsias líquidas en la detección del cáncer - Genotipia

La detección de la secuencia amplificada se puede llevar a cabo mediante visualización tras tinción con EtBe del ADN después de la electroforesis en gel o usando un marcador detectable de acuerdo con técnicas conocidas y similares.

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Es decir, el oligómero de captura incluye una secuencia que se une específicamente a su PCA3 o a otra secuencia objetivo marcador específico de la próstata. Por supuesto, otros procedimientos cáncer de próstata que analiza la sangre rna en captura son bien conocidos en la técnica. El procedimiento de captura en la estructura del capuchón Edery y col. Una sonda inmovilizada es un oligómero unido a un soporte sólido que facilita la separación de la secuencia objetivo unida del material no unido en una muestra.

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El polipéptido puede estar codificado por una secuencia de longitud completa o por cualquier porción de la secuencia codificante, con tal de que se mantenga la actividad funcional de la proteína. Por ejemplo, los nucleótidos cáncer de próstata que analiza la sangre rna en pueden añadir, delecionar, sustituir o invertir o transponer a una posición nueva. Por brevedad, las unidades por ejemplo, 66, No obstante, si el segundo marcador. Por tanto, cuando la muestra es orina, este segundo marcador específico de próstata normalmente no se expresa en otros tipos de células por ejemplo, las células del sistema del tracto urinario que se van a encontrar en la muestra de orina.

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